Το φυτό Cistus creticus διαθέτει αδενικά επιδερμικά τριχώματα που λειτουργούν ως αποφύσεις που συσσωρεύουν και εκκρίνουν δευτερογενείς μεταβολίτες.
Η ρητίνη που εκκρίνεται από τους αδένες αυτούς, γνωστή και ως λάδανο, χρησιμοποιείται από την αρχαιότητα για τις φαρμακευτικές και αρωματικές της ιδιότητες . Αυτές οι παραδοσιακές εφαρμογές επιβεβαιώθηκαν από ευρήματα, τα οποία δείχνουν ότι τα συστατικά λαβδανικού τύπου της ρητίνης, εμφάνισαν ισχυρή in vitro κυτταροτοξικότητα η κυτταροστατικότητα σε διάφορες μορφές ανθρώπινου καρκίνου.
Ο μεταγραφικός παράγοντας TTG1 αποτελεί ένα κομβικό γονίδιο, υπεύθυνο για τη μορφογένεση των τριχωμάτων στα φύλλα, των ριζικών τριχιδίων αλλά και για τη βιοσύνθεση των φλαβονοειδών. Απομονώθηκε το ομόλογο γονίδιο του AtTTG1 από το Cistus creticus (CcTTG1) το οποίο συμπληρώνει τον πλειοτροπικό φαινότυπο του μεταλλάγματος ttg1 του Arabidopsis αποκαθιστώντας το σχηματισμό τριχώματος, την πυκνότητα ριζικών τριχιδίων και τη βιοσύνθεση των φλαβονοειδών.
Με τη χρήση της τεχνικής Yeast two-hybrid, διαπιστώθηκε πως το CcTTG1 αλληλεπιδρά με δύο μεταγραφικούς παράγοντες της οικογένειας των SPL (Squamosa Promoter Binding Like transcription factors), τις CcSPLA και CcSPLB. Οι πρωτεΐνες CcSPLA και CcSPLB παρουσιάζουν μεγάλη ομολογία με τις πρωτεΐνες AtSPL4 και AtSPL5 του Arabidopsis thaliana.
Σκοπός της συγκεκριμένης εργασίας, είναι η διερεύνηση της αλληλεπίδρασης των αντίστοιχων μεταγραφικών παραγόντων AtSPL4 και AtSPL5 με την πρωτεΐνη AtTTG1 και η οπτικοποίηση της όποιας αλληλεπίδρασης με BiFC-split GFP.
Cistus creticus plant has grandular epidermal trichomes working as outgrowth that accumulate and excrete secondary metabolites.
Resin excreted by these glands, known as laudanum, has been used since ancient times for pharmaceutical and aromatic purposes. These traditional applications have been confirmed by recent findings, showing that resin’s laudanic type components indicated strong in vitro cytotoxicity and cytostatic behavior towards human cancer types.
TTG1 transcription factor is a nodal gene, responsible for not only leaf trichome and root hair morphogenesis but also flavonoid biosynthesis. A gene called AtTTG1 has been isolated and found to be homologue to the one from Cistus creticus(CcTTG1). It has been found that this specific gene complements the pleiotropic phenotype of Arabidopsis’ thaliana ttg1 mutant restoring trichome formation, root hair density and flavonoid biosynthesis.
Usage of yeast-two-hybrid method, lead us to the confirmation of CcTTG1 interaction with two SPL(SQUAMOSA PROMOTER BINDING PROTEIN LIKE) transcription factors, CcSPLA and CcSPLB. CcSPLA and CcSPLB proteins show great percentagy of homology to proteins AtSPL4 and AtSPL5 respectively.
This assignment’s goal, is the investigation of possible interactions between AtSPL4/AtSPL5 transcription factors and AtTTG1 protein using BiFC-split YFP method for visualization.
