Απομόνωση και χαρακτηρισμός μεταλλαγμένων στελεχών ανθεκτικών στη ριφαμπικίνη του βακτηρίου Azospirillum lipoferum (στέλεχος Α)

Abstract

Διάφοροι μικροοργανισμοί του εδάφους έχουν την ικανότητα να αναπτύσσονται στην περιοχή της ριζόσφαιρας των φυτών και να συμβάλλουν στην αύξηση και ανάπτυξη αυτών. Η ανάπτυξη αυτών των μικροοργανισμών μπορεί να επηρεάζεται από διάφορους περιβαλλοντικούς παράγοντες (θερμοκρασία, pH, θρεπτικά συστατικά) αλλά και από παράγοντες που μπορεί να αναστέλλουν την αύξησή τους (π.χ. αντιβιοτικά). Στην παρούσα μεταπτυχιακή εργασία μελετήθηκε η ικανότητα ανάπτυξης του στελεχώνΗ2 και 4a2 του βακτηρίου Azospirillum brasilenseκαι του στελέχους Α του βακτηρίου Azospirillum lipoferumσε υπόστρωμα παρουσία διαφορετικών οργανικών οξέων (μηλικό οξύ και κιτρικό οξύ) καθώς επίσης και η ομαδική κίνησή τους σε υπόστρωμα περιεκτικότητας 0,6% w/v άγαρ παρουσία των παραπάνω οργανικών οξέων. Επίσης, για το στέλεχος Α του βακτηρίου A. Lipoferum μελετήθηκε η ικανότητά του να αναπτύσσει ανθεκτικές μορφές όταν βρίσκεται σε υπόστρωμα που περιέχει το αντιβιοτικό ριφαμπικίνη σε διαφορετικές συγκεντρώσεις (50 mg/ml και 100 mg/ml). Αυτές οι ανθεκτικές μορφές, στη συνέχεια μελετήθηκαν ως προς την ικανότητά τους να κινούνται ομαδικά σε υποστρώματα περιεκτικότητας 0,6% άγαρ, παρουσία και απουσία ριφαμπικίνης και για τις δύο συγκεντρώσεις (50 mg/ml και 100 mg/ml). Με αλληλούχιση του γονιδιώματος των ανθεκτικών στελεχών εντοπίστηκαν οι περιοχές στις οποίες έγιναν οι μεταλλάξεις ώστε τα βακτήρια να εμφανίσουν το χαρακτήρα της ανθεκτικότητας στη ριφαμπικίνη.

Various soil microorganisms have the ability to grow in the region of the rhizosphere of plants and contribute to the growth and development of these. The growth of these microorganisms can be influenced by environmental factors such as temperature, pH, nutrients, but also and factors that may inhibit their growth (eg. antibiotics). In this thesis we studied the ability of the strains H2 and 4a2 of the bacterium Azospirillum brasilense and the strain A of the bacterium A. lipoferum, to grow on a substrate which may contain different organic acids (malic acid and citric acid), as well as swarming motility on substrates with 0,6% w/v agar and the presence of the above organic acids. Also, for the strain A of the bacterium A. lipoferum, was studied the ability to develop resistant forms when in the substrate exists the antibiotic rifampicin at different concentrations (50 mg/ml and 100 mg/ml). Then, the mutants were studied for their ability to swarm when the agar concentration is 0.6% and there is a presence or absence of rifampicin for both concentrations (50 mg/ml and 100 mg/ml). By sequencing the genome of resistant strains we could identify the areas where the mutations which give resistance, occurred