Ανάπτυξη ανοσολογικής μεθόδου για την αξιολόγηση αυθεντικότητας γαλακτοκομικών προϊόντων

Abstract

Σκοπός της παρούσας εργασίας ήταν η ανάπτυξη και χρήση ανοσοενζυµικής µεθόδου ELISA για την ακριβή ανίχνευση του είδους γάλακτος που χρησιµοποιείται για την παρασκευή γαλακτοκοµικών προϊόντων. Για το σκοπό αυτό παράχθηκαν αντισώµατα έναντι της αίγειας ανοσοσφαιρίνης IgG και έγινε έλεγχος του τίτλου αντισωµάτων µε εφαρµογή έµµεσης ELISA. Τα αντισωµάτα αίγειας IgG παραλήφθησαν µετά από καθαρισµό τους µε χρήση χρωµατογραφίας συγγένειας. Για την ανάπτυξη της ανοσοενζυµικής µεθόδου χρησιµοποιήθηκαν τα παραπάνω αντισώµατα τα οποία αποτέλεσαν το αντίσωµα δέσµευσης. Η µέθοδος εφαρµόστηκε σε µίγµατα γνωστής πρόσµιξης αίγειου γάλακτος σε πρόβειο (5-100%). Επίσης ερευνήθηκε η επίδραση της θερµικής επεξεργασίας στην αποτελεσµατικότητα της µεθόδου. Παράλληλα πραγµατοποιήθηκε προσδιορισµός της σύνθεσης των λιπαρών οξέων στα µίγµατα πρόβειου-αίγειου γάλακτος µε σκοπό την ανίχνευση νοθείας µε βάση τη διαφοροποίηση του ποσοστού των λιπαρών οξέων, αλλά και σε µίγµατα αγελαδινού-αίγειου και αγελαδινού-πρόβειου. Από τα αποτελέσµατα της ανοσοενζυµικής µεθόδου προέκυψε ότι υπήρξε υψηλός συντελεστής συσχέτισης (r=0.93) µεταξύ πραγµατικού και ανιχνεύσιµου ποσοστού αίγειου γάλακτος. Η µέθοδος παρουσίασε υψηλή ακρίβεια µε συντελεστή διακύµανσης 3.96%. Η µέθοδος, µπορεί να εφαρµοστεί εξίσου αποτελεσµατικά και στους 65ºC για 5 min, ενώ η θερµική επεξεργασία των 90ºC για 5min επηρέασε την αποτελεσµατικότητα της µεθόδου. H θέρµανση του γάλακτος στους 68ºC για 10 min προκάλεσε µείωση του ανιχνεύσιµου ποσοστού αίγειου γάλακτος κατά 17% ενώ η θέρµανση στους 80°C για 15 sec προκάλεσε µείωση κατά 11%. Από τον προσδιορισµό της σύνθεσης των λιπαρών οξέων στα µίγµατα πρόβειουαίγειου

παρατηρήθηκε διαφοροποίηση στον C18. Περισσότερες διαφοροποιήσεις παρατηρήθηκαν στα µίγµατα αγελαδινού-αίγειου, συγκεκριµένα στα C8, C10, C16, στα µικρής και µεσαίας αλύσου λιπαρά οξέα (C4-C16) όπως και στο κλάσµα C12:C10 και τέλος στα µίγµατα αγελαδινού-πρόβειου παρατηρήθηκε διαφοροποίηση στα C8, C10, C16, στα µεσαίας αλύσου λιπαρά οξέα (C12-C16) όπως και στο κλάσµα C12:C10.

The purpose of this study was the development and use of an ELISA immunoassay method to accurately detect the type of milk used to manufacture dairy products. For this purpose, antibodies were produced against goat immunoglobulin IgG and became control of titer antibodies by using indirect ELISA. Goat IgG antibodies were received after purification by affinity chromatography. For the development of the immunoassay method were used the above produced antibodies. The method was applied to mixtures of known quantity of goat milk in sheep milk (5-100%). Also, was researched the effect of heat treatment on the effectiveness of the method. Additionaly, was determined the composition of mixtures of fatty acids in sheepgoat milk to detect fraud based on the modulation rate of fatty acids, but also of mixtures

of cows-goats milk and cows-sheep milk.

The

results of the immunoassay method showed that there was a high correlation coefficient (r = 0.93) between real and detectable rate of goat milk. The method showed high precision with coefficient of variation, 3.96%. The method can be applied equally effectively to 65º C for 5 min, while the thermal treatment of 90º C for 5min affected the effectiveness of the method. The heating of milk at 68º C for 10 min caused a reduction in detectable percentage of goat's milk by 17% while the heating at 80° C for 15 sec caused a decrease of 11%. By determining the composition of mixtures of fatty acids in sheep-goat milk, differentiation observed only in C18. More differences were observed in mixtures of cows-goats milk, particularly in the C8, C10, C16, small and medium-chain fatty acids (C4-C16) as the fraction of C12: C10 and finally in mixtures of cow-sheep milk, variation was observed in C8, C10, C16, the medium-chain fatty acids (C12-C16) as the fraction of C12: C10.